要想蛋白活性好,溶解稀释要记牢!
一、查看说明书
1. 确定合适的溶解液
收到产品后,首先应查看说明书中细胞因子储存和处理的方法。见下图:
2. 确定合适的温度
图中的表格给出了细胞因子在冻干粉(lyophilized)状态下的溶解(reconstituted)和稀释(extended storage)的储存温度以及时间,您可以根据自己的实际需要选择。
二、溶解
1. 离心
收到的管子内为冻干粉,开盖前要快速离心10000-12000rpm x 30s。2. 溶解
根据说明书红色标识地方的描述,选择合适的溶解液,溶解到后边的浓度范围内。如此可以确保蛋白充分溶解复性,保证产品质量。请不要使用非建议溶液溶解。
目的:使细胞因子从无活性的冻干粉状态充分溶解复性成为有活性的蛋白溶液。
注意:不要用涡旋振荡仪剧烈涡旋,可以用枪头轻轻吹打几次助溶。有的细胞因子溶解比较慢,需要在室温静置或者摇床低速摇一段时间使充分溶解。
3.短期储存
溶解后的蛋白溶液可以在2-8度储存1周。4.长期储存
如果您的实验,一周内不能用完。必须将第2步中获得的溶液用含载体蛋白的溶液进一步稀释。(详见:三、稀释)
目的:对溶解一步的蛋白溶液进行稀释冻存。加入载体蛋白可以封闭掉管壁上的蛋白结合位点,且可以在低温下维持细胞因子的稳定。
三、稀释
1. 配制
配制0.1%BSA或者10
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